1.哪些物质会影响cck8试剂的测定？

当有还原性物质存在时会影响CCK8的测定，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。

2.在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？

可以缩短加入CCK8后的培养时间。例如：可以把加入CCK8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

3.设定参比波长的目的是什么？必须设定吗？

不一定要设定。cck8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

4.说明书上仅写了96孔板的测定方法，如果使用24孔板货12孔板，应该加多少量cck8试剂？

一般情况下建议加入cck8试剂的量是培养基体积的1/10。

5.在cck8试剂显色过程中，如何终止反应？

有一下几种方法（96孔板）： 1、 在显色反应后，将培养板放置4℃冰箱内。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%（w/v）的SDS（十二烷基硫酸钠）溶液。注意：反应停止后，应在24小时之内测定。

6.必须预培养细胞吗？

不一定。如果要向保持细胞的状态，建议预培养细胞。如果不做细胞预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养，但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

7.如果加入的药物中含有金属，是否会有影响？

金属对cck8试剂显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话，将会100%抑制。

8.cck8试剂的保存条件？

在避光条件下cck8试剂在4℃可保存一年。如果需要保存较长时间的话，推荐在-20℃下保存。但是cck8试剂若反复解冻和冰冻将会增加空白吸收，从而影响检测结果，若经常使用可将试剂存放在4℃冰箱内保存。

9.预培养后，更换培养基需要细胞计数吗？

一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数盘计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。

10.cck8试剂对于不同的细胞，灵敏度是否一样？

不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入cck8试剂培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长cck8试剂的加入时间或增加细胞数量来解决。

11.悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？

悬浮细胞由于染色比较困那，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞染色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。

12.应该每次做标准曲线吗？

建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样，对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能会有轻微的差异，对于不同的批号建议分别做标准曲线。

13.有时在药物作用情况下，细胞已经死亡，但是脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？

不能。由于cck8试剂是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量，如果细胞已经死亡，但脱氢酶的活性还在，则试剂测定的细胞数量将会比真实值高，不能真实反映活细胞数量，建议采用别的方法测定。

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