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omega试剂盒的详细操作方法介绍
发布时间:2020-05-13 点击次数:304次
  omega试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗鸡IGFBP-4抗体包被于酶标板上,实验时样品或标准品中的鸡IGFBP-4与包被抗体结合,游离的成分被洗去。
  依次加入生物素化的抗鸡IGFBP-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗鸡IGFBP-4抗体与结合在包被抗体上的鸡IGFBP-4结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。
  加入显色底物(TMB),TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色,加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值,鸡IGFBP-4浓度与OD450值之间呈正比,通过绘制标准曲线计算出样品中鸡IGFBP-4的浓度。
  omega试剂盒的详细操作过程:
  1、ADP试剂盒;omega试剂盒使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。
  2、空白孔不加样,只加显色剂A,B和终止液用于调零。
  3、标准品孔:每孔加入稀释好的标准品50μl,零孔加入标准品/样品稀释液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl。
  4、样品孔:加入样品50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl。
  5、轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。
  6、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。
  7、次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  8、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中,轻轻摇晃,盖上封板膜,37℃培养箱中孵育30min。
  9、第二次洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  10、显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
  11、终止:每孔加终止液50μl,终止反应。
  12、测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后10分钟以内进行。
  13、计算:omega试剂盒根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程,建议用专用计算软件进行计算,推荐使用ELISAcalc进行计算,拟合模型选用logistic曲线(四参数)。

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