omega试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗鸡IGFBP-4抗体包被于酶标板上，实验时样品或标准品中的鸡IGFBP-4与包被抗体结合，游离的成分被洗去。

　　依次加入生物素化的抗鸡IGFBP-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗鸡IGFBP-4抗体与结合在包被抗体上的鸡IGFBP-4结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。

　　加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下呈现蓝色，加终止液后变成黄色。用酶标仪在450nm波长处测OD值，鸡IGFBP-4浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出样品中鸡IGFBP-4的浓度。

　　omega试剂盒的详细操作过程：

　　1、ADP试剂盒；omega试剂盒使用前请先将试剂盒在室温下平衡半小时。

　　2、空白孔不加样，只加显色剂A，B和终止液用于调零。

　　3、标准品孔：每孔加入稀释好的标准品50μl，零孔加入标准品/样品稀释液50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。

　　4、样品孔：加入样品50μl，然后加入生物素抗原工作液50μl。

　　5、轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。

　　6、将25倍浓缩洗涤液用蒸馏水25倍稀释后备用。

　　7、次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　8、加入50μl亲和素-HRP到标准品孔和样品孔中，轻轻摇晃，盖上封板膜，37℃培养箱中孵育30min。

　　9、第二次洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　10、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟。

　　11、终止：每孔加终止液50μl，终止反应。

　　12、测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后10分钟以内进行。

　　13、计算：omega试剂盒根据浓度和OD值算出标准曲线的回归方程，建议用计算软件进行计算，推荐使用ELISAcalc进行计算，拟合模型选用logistic曲线（四参数）。