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elisa检测试剂盒的五大检测方法介绍
更新时间:2020-06-16 点击次数:1257次
  elisa检测试剂盒是判断机体免疫功能的一个重要指标,因而具有重要的实验室研究价值,同时还可能在临床上有诸多实用价值、包括许多疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗监测等。细胞因子试剂盒在感染科,肿瘤科等相关科室应用广泛。
  下面为您介绍elisa检测试剂盒的五大检测方法:
  1、夹心法:分为双抗体夹心法和双抗原夹心法,双抗体夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势,但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测,主要用于检测各种大分子抗原--例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等疾病相关的,以及在科研中检测细胞因子等。由于双抗体夹心法特异性高,在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应,称为双抗体夹心一步法,因为操作时间短,在商业化生产中有很大优势。
  2、间接法:使用了二抗增加信号强度,也使抗体的选择多样化,然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体,主要用于疾病的诊断,其优点是只需要改变包被抗原,酶标抗体是通用的。
  3、竞争法:是用样本中的游离抗体/抗原与固相的酶标抗体/抗原竞争性结合的分析方法。当游离抗体(或抗原)浓度越高,则能与固定抗原(或抗体)结合的酶标抗体(或抗原)就越少,后续显色就越浅,即与对照相比,显色越浅,表示检测样本中抗体(或抗原)含量越高。该法特别适合小分子物质的检测也可用于检测比较不纯的样本,且重复性好,但是检测的灵敏度和专一性较差。
  4、捕获法:全称捕获包被法也称为反向间接法,主要用于测定血清中某类抗体亚型如IgM。为排除血清中IgG的干扰,用抗IgM抗体包被后用于捕捉样本中的IgM,然后加入特异性结合抗原进行后续检测。捕获包被法常用于对病毒性感染的早期诊断。
  在测定IgM的实验中常受到类风湿因子(RF,一种能结合多种动物IgG Fc的自身IgM抗体)的干扰,导致假阳性反应。采用F(ab')或Fab片段制备酶标抗体可以消除RF的干扰,这一方法在双抗体夹心法中也具有同样的效用。
  5、直接法:仅需要抗原和酶标一抗,操作简便,可避免交叉反应,然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求,同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见,它并不能对样本中抗体进行定量分析,因为样本中抗体是非酶标抗体,无法进行后续显色,但是该法经过改进就是竞争法。